以下五個(gè)問(wèn)題 讓你更了解蛋白檢測(cè)
點(diǎn)擊次數(shù)：803 更新時(shí)間：2019-08-15
問(wèn)題一：可以提供哪幾類蛋白樣品？
解答：待檢測(cè)的蛋白樣品可以是蛋白溶液、蛋白凍干粉或直接切膠的濕膠塊。對(duì)于Western Blotting，在PVDF膜上的蛋白樣品，是無(wú)法回收進(jìn)行試驗(yàn)的。
問(wèn)題二：蛋白樣品如何保存適宜？
解答：蛋白樣品不要像平時(shí)試驗(yàn)一樣，放在緩沖溶液中保存，因?yàn)椴煌木彌_液體系中的無(wú)機(jī)鹽成份，會(huì)嚴(yán)重干擾蛋白檢測(cè)結(jié)果。如切膠后的膠條直接放在EP管中，低溫保存即可。
問(wèn)題三：如何避免待檢測(cè)蛋白的二次污染問(wèn)題？
解答：很多客戶抱怨蛋白純度無(wú)法達(dá)到要求，檢測(cè)結(jié)果不理想，并且會(huì)出現(xiàn)莫名其妙的角蛋白峰。這是典型的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中二次污染，這種二次污染源就是我們的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。蛋白質(zhì)譜檢測(cè)中的角蛋白峰主要在染膠、脫色、切膠和酶解過(guò)程中引入的，其來(lái)源包括我們的皮膚屑，頭皮屑，衣物上的動(dòng)植物蛋白等，因此在試驗(yàn)關(guān)鍵操作過(guò)程中，如切膠一定要身穿實(shí)驗(yàn)服，佩戴手套，口罩和發(fā)套在通風(fēng)櫥中進(jìn)行；洗染膠的容器也需要使用70%的酒精清洗，再使用去離子水沖洗，實(shí)驗(yàn)過(guò)程專心致志，做到快速、準(zhǔn)確。
問(wèn)題四：蛋白濃度偏低，如何濃縮？
解答：可以使用超濾法濃縮，對(duì)蛋白性質(zhì)不會(huì)有改變，蛋白種類也不容易丟失，但是損耗比較大，甘油和去垢劑等會(huì)堵塞濾膜，影響效果；也可以使用凍干法，對(duì)樣品進(jìn)行低溫冷凍干燥濃縮；常見(jiàn)的還有沉淀法，該方法容易操作并且方便快捷，但是可能會(huì)有部分種類的蛋白無(wú)法沉淀導(dǎo)致蛋白種類丟失。
問(wèn)題五：提供多少蛋白質(zhì)才能滿足實(shí)驗(yàn)要求？
解答：正常情況下，使用考馬斯亮藍(lán)染色能夠看見(jiàn)的點(diǎn)，就有機(jī)會(huì)鑒定出來(lái)，將蛋白質(zhì)收集后郵寄給鐘鼎生物即可，不同的檢測(cè)項(xiàng)目，對(duì)蛋白質(zhì)的需要量是不同的，但是為了便于我們操作，請(qǐng)?zhí)峁┳懔康牡鞍?，盡量保證濃度大于1mg/ml，蛋白純度大于90%，在條件允許情況下蛋白質(zhì)的量越多越好，單項(xiàng)檢測(cè)少不得低于5ug。
